Principoj kaj Metodoj de Kvanta Analizo per Likva Kromatografio

La apartigmekanismo de likva kromatografio baziĝas sur la diferenco en la afineco de la komponantoj en la miksaĵo por la du fazoj.

Laŭ la malsamaj senmovaj fazoj, likva kromatografio estas dividita en likva-solida kromatografio, likva-likva kromatografio kaj ligita faza kromatografio.La plej vaste uzataj estas likva-solida kromatografio kun silika ĝelo kiel plenigaĵo kaj ligita faza kromatografio kun mikrosiliko kiel matrico.

Laŭ la formo de senmova fazo, likva kromatografio povas esti dividita en kolonkromatografion, paperan kromatografion kaj maldiktavolan kromatografion.Laŭ la adsorba kapablo, ĝi povas esti dividita en adsorban kromatografion, dispartigan kromatografion, ion-interŝanĝan kromatografion kaj ĝelan trapenetran kromatografion.

En la lastaj jaroj, altprema likva fluo sistemo estis aldonita al la likva kolumna kromatografiosistemo por igi la moveblan fazon flui rapide sub alta premo por plibonigi la disiga efiko, do alt-efikeca (ankaŭ konata kiel altprema) likva kromatografio. aperis.

PARTO
01 Principo de Kvanta Analizo de Likva Kromatografio

Kvantigi surbaze de kvalita, puraj substancoj estas postulataj kiel normoj;

Likva kromatografio-kvantigo estas relative kvanta metodo: tio estas, la kvanto de la analito en la miksaĵo estas taksita de konata kvanto de pura norma provaĵo.

PARTO
02 Bazo por Kvantigo per Likva Kromatografio

La kvanto de la mezurita komponento (W) estas proporcia al la respondvaloro (A) (pinta alteco aŭ pinta areo), W=f×A.

Kvanta korekta faktoro (f): Ĝi estas la proporcieckonstanto de la kvanta kalkulformulo, kaj ĝia fizika signifo estas la kvanto de la mezurita komponento reprezentita per la unuoresponda valoro (pinta areo).

La kvanta korektfaktoro povas esti akirita de la konata kvanto de norma provaĵo kaj ĝia respondvaloro.

Mezuru la respondvaloron de la nekonata komponento, kaj la kvanto de la komponento povas esti akirita per la kvanta korekta faktoro.

PARTO
03 Komunaj terminoj en kvanta analizo

Provaĵo (specimeno): solvo enhavanta analiton por kromatografia analizo.Dividite en normajn kaj nekonatajn specimenojn.

Normo: pura produkto kun konata koncentriĝo.Nekonata specimeno (nekonata): La miksaĵo, kies koncentriĝo estas testota.

Specimena pezo: La originala pezo de la specimeno por esti testita.

Diluo: La dilua faktoro de la nekonata specimeno.

Komponento : la kromatografia pinto kvante analizenda, tio estas, la analito kies enhavo estas nekonata.

Kvanto de komponanto (kvanto): la enhavo (aŭ koncentriĝo) de la testota substanco.

Entegereco : La komputila procezo de mezurado de la pintareo de kromatografa pinto per komputilo.

Kalibra kurbo: Linia kurbo de komponentenhavo kontraŭ respondvaloro, establita de konata kvanto de norma substanco, uzita por determini la nekonatan enhavon de la analito.

PARTO
04 Kvanta Analizo de Likva Kromatografio

1. Elektu kromatografian metodon taŭgan por kvanta analizo:

l Konfirmu la pinton de la detektita komponanto kaj atingu rezolucion (R) pli grandan ol 1.5

l Determinu la konsistencon (purecon) de la kromatografiaj pintoj de la testitaj komponantoj

l Determini la detektan limon kaj kvantigan limon de la metodo;sentemo kaj lineara gamo

2. Establi kalibran kurbon kun normaj specimenoj de malsamaj koncentriĝoj

3. Kontrolu la precizecon kaj precizecon de kvantaj metodoj

4. Uzu la respondan kromatografio-administran programaron por efektivigi specimenan kolekton, datumtraktadon kaj raporti rezultojn

PARTO
05 Identigo de kvantaj pintoj (kvalitaj)

Kvalite identigu ĉiun kromatografian pinton por esti kvantigita

Unue, uzu la norman provaĵon por determini la retentempon (Rt) de la kromatografia pinto por esti kvantigita.Komparante la retentempon, trovu la komponanton respondan al ĉiu kromatografia pinto en la nekonata specimeno.La kromatografia kvalita metodo estas kompari la retentempon kun la norma provaĵo.La kriterio Nesufiĉaplia konfirmo (kvalita)

1. Norma aldono metodo

2. Uzu aliajn metodojn samtempe: aliajn kromatografiajn metodojn (ŝanĝu la mekanismon, kiel: uzante malsamajn kromatografiajn kolumnojn), aliajn detektilojn (PDA: spektra komparo, spektra biblioteko serĉo; MS: amasspektra analizo, spektra biblioteko serĉo)

3. Aliaj instrumentoj kaj metodoj

PARTO
06 Konfirmo de Kvanta Pinta Konsistenco

Konfirmu kromatografian pintkonsistecon (pureco)

Certigu, ke estas nur unu mezurita komponanto sub ĉiu kromatografia pinto

Kontrolu por interfero de kuneluaj substancoj (malpuraĵoj)

Metodoj por Konfirmo de Kromatografia Pinta Konsistenco (Pureco)

Komparante Spektrogramojn kun Photodiode Matrix (PDA) Detektiloj

Identigo de Pinta Pureco

2996 Pureco-Angula Teorio

Kvantaj metodoj ofte uzataj en PARTO 07

Norma kurba metodo, dividita en eksteran norman metodon kaj internan norman metodon:

1. Ekstera norma metodo: plej uzata en likva kromatografio

Serio de normaj provaĵoj de konataj koncentriĝoj estis preparitaj uzante purajn provaĵojn de la kunmetaĵoj por esti testitaj kiel normaj provaĵoj.injektita en la kolonon ĝis ĝia respondvaloro (pinta areo).
Ene de certa intervalo, ekzistas bona linia rilato inter la koncentriĝo de la norma specimeno kaj la respondvaloro, nome W= f×A , kaj norma kurbo estas farita.

Sub la ekzakte samaj eksperimentaj kondiĉoj, injektu la nekonatan specimenon por akiri la respondvaloron de la mezurota komponanto.Laŭ la konata koeficiento f , la koncentriĝo de la mezurota komponanto povas esti akirita.

La avantaĝoj de la ekstera norma metodo:simpla operacio kaj kalkulo, ĝi estas kutime uzata kvanta metodo;ne necesas, ke ĉiu komponanto estu detektita kaj forigita;norma specimeno estas postulata;la mezurkondiĉoj de norma specimeno kaj nekonata specimeno devus esti konsekvencaj;la injekta volumo devus esti preciza.

Malavantaĝoj de la ekstera norma metodo:La eksperimentaj kondiĉoj estas postulataj por esti altaj, kiel ekzemple la sentemo de la detektilo, la flukvanto, kaj la konsisto de la movebla fazo ne povas esti ŝanĝitaj;la volumeno de ĉiu injekto devus havi bonan ripeteblon.

2. Interna norma metodo: preciza, sed ĝena, plej uzata en normaj metodoj

Konata kvanto de la interna normo estas aldonita al la normo por fari miksitan normon, kaj serio da labornormoj de konata koncentriĝo estas preparitaj.La molara rilatumo de normo al interna normo en la miksita normo restas senŝanĝa.Injektu en la kromatografian kolonon kaj prenu (norma specimena pinta areo/interna norma specimena pinta areo) kiel respondvaloro.Laŭ la linia rilato inter la respondvaloro kaj la koncentriĝo de la labornormo, nome W= f×A , norma kurbo estas farita.

Konata kvanto de interna normo estas aldonita al la nekonata specimeno kaj injektita en la kolonon por akiri la respondvaloron de la mezurota komponanto.Laŭ la konata koeficiento f , la koncentriĝo de la mezurota komponanto povas esti akirita.

La karakterizaĵoj de la interna norma metodo:Dum la operacio, la specimeno kaj la interna normo estas miksitaj kune kaj injektitaj en la kromatografian kolumnon, tiel longe kiel la proporcio de la kvanto de la mezurita komponanto al la interna normo en la miksita solvo estas konstanta, la ŝanĝo de la specimena volumo estas konstanta. ne influos la kvantajn rezultojn..La interna norma metodo kompensas la influon de la specimena volumo, kaj eĉ la movebla fazo kaj detektilo, do ĝi estas pli preciza ol la ekstera norma metodo.

PARTO
08 Faktoroj influantaj kvantajn analizrezultojn

Malbona precizeco povas esti kaŭzita de:

Malĝusta pintarea integriĝo, specimena putriĝo aŭ malpuraĵoj enkondukitaj dum specimena preparado, specimena fiolo ne sigelita, specimena aŭ solva volatiligo, malĝusta specimena preparo, provaj injektaj problemoj, malĝusta interna norma preparo

Eblaj kialoj de malbona precizeco:

Malĝusta pintintegriĝo, injekto- aŭ injektilproblemoj, specimena putriĝo aŭ malpuraĵoj enkondukitaj dum specimena preparado, kromatografiaj problemoj, degradita detektilrespondo